自然杀伤(NK)细胞在识别和杀死肿瘤和病毒感染的先天免疫和 后天免疫反应中扮演着关键的角色。因此，已有许多研究尝试 研发在体外激活和扩增NK细胞的方法，以用于和免疫细胞相关 研究，而目前的方法包括使用细胞因子、诱导因子以及饲养细 胞1，其中细胞因子在调节NK细胞的活性中具有核心作用。据 报道，IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21和IFN-Ϋ被归类为NK细胞 的细胞毒性和增殖的活化细胞因子，能够增强NK细胞对各种肿 瘤的细胞毒性作用2。然而，这些激活NK细胞的细胞因子组合 仍需研究人员进一步优化。

康宁NK无血清培养试剂盒II中含有1瓶1 mL的包被培养基，1瓶 50 mL的激活培养基，1瓶1,000 mL的扩增培养基和1个透气性 细胞培养袋。前两个试剂专用于NK细胞的初期激活培养，扩增 培养基和细胞培养袋则用于NK细胞后期扩增培养。NK激活培 养基和扩增培养基均采用优质的试剂和符合目前的良好生产规 范(cGMP)要求的原料制造。

使用康宁NK无血清培养试剂盒II可快速激活扩增NK细胞，可获取数量大（~70亿细胞，即230倍的增殖），具有高细胞毒性效力（在 E/T比例为5：1的状况下达到100％的细胞毒性效力）的NK细胞。 培养于康宁NK无血清培养试剂盒II的NK细胞在生长、NK阳性细胞比率以及细胞毒性效力方面均表现出了很好的性能。

培养于康宁NK无血清培养试剂盒II的NK细胞在生长、NK阳性细胞比率以及细胞毒性效力方面均表现出了很好的性能。

1. NK细胞形态
树突状细胞附着在培养瓶表面上，而 NK 细胞经培养会形成较小的 细胞团块。该细胞团块的体积会随着细胞密度的上升而增加。图 1 显示培养第 10 天后 NK 细胞在不同培养基中的形态。NK 培养试 剂盒和 NK 无血清培养试剂盒 II 的培养液中观察到的细胞团块远 多于其他品牌同类产品 I 和其他品牌同类产品 Y 的培养基中观察 到的细胞团块。

图1. 培养10天后NK细胞的形态。培养于NK无血清培养试剂盒II、NK培养 试剂盒、其他品牌同类产品I和其他品牌同类产品Y10天后的NK细胞。以 上为随机选择的照片。比例尺：200 µm。

2. NK细胞的扩增曲线
对于NK细胞的增殖，如图2和图3所示，NK细胞在分别利用NK无血清培养试剂盒II和NK培养试剂盒培养14天后扩增了230倍和200 倍，总细胞数量分别为7 x 10⁹ 个细胞和 6 x 10⁹ 个细胞，比其他品牌同类产品I的培养试剂盒（只达到70倍的扩增）多了3倍。利用其 他品牌同类产品Y的培养试剂盒培养的NK细胞呈比较差的扩增表现，这也与其细胞形态学观察结果一致。

3. NK细胞的表型分析
NK细胞的特异表面标志物为CD3-/CD56+。流式细胞的分析结果 显示使用NK无血清培养试剂盒II可获得86.7％的NK阳性细胞，而 使用其他品牌同类产品I和其他品牌同类产品Y的培养试剂盒则获 得相对较少的NK阳性细胞（分别为66.1％和78.8％），数据如图4所示。

4. 肿瘤细胞杀伤能力检测
将5×10⁵个及1×10⁶个效应细胞（NK细胞）/mL分别与1×10⁵个靶 细胞（K562细胞）/mL在96孔微孔板（100 µL）中混合后置于含 5% CO2 的培养箱中在37℃下隔夜共培养。分析前在每孔细胞均加 入10 µL的细胞计数试剂盒8（CCK-8）试剂（Sigma目录编号： 96992）并进一步在37℃下孵育4小时后利用SpectraMax M4^® （Molecular Devices）多功能微孔板检测仪读取吸光度数据。在 E/T比例为5的状况下，康宁NK无血清培养试剂盒II与其他品牌同 类产品I（70％）和其他品牌同类产品Y（60％）相比具有更强的 细胞毒性（100％）。